锐博生物常规siRNA

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锐博生物常规siRNA
常规siRNA简介：
常规化学合成siRNA双链，特异性靶点设计，覆盖人、小鼠、大鼠全基因组的所有基因，适合进行各种细胞RNAi实验。
常规siRNA描述：
-- 采用siCatch™ siRNA design智能设计；
-- 通过系统性优化，保证靶点特异性；
-- 均经过严格的质谱检测，保证siRNA质量和纯度；
锐博生物提供覆盖人全基因组所有基因的常规siRNA，您可以通过以下产品列表查找待研究基因的siRNA，其他物种的基因siRNA需定制。
常规siRNA实验数据：
常规化学合成siRNA多为19nt RNA + dTdT (3’ 悬垂)的RNA双链分子，未经任何化学修饰。Sense：正义链，RNA；Antisense：反义链，RNA；dTdT：两端悬垂，DNA。
针对人源EGFR基因的三对siRNA及Ncontrol，以50nM终浓度转染A549细胞系，48小时后用qPCR方法检测siRNA沉默效果，结果表明siRNA的mRNA水平沉默效果均达到70%。72小时后用WB方法证实EGFR蛋白表达水平的显著降低。
常规siRNA使用方法：
为了降低细胞密度、试剂用量，转染效率等因素导致的孔间差异，保证实验的可靠性和可重复性，一般建议：
1）转染实验中每个转染样品至少设置3个复孔；
2）接种细胞时，每孔接种的细胞数量尽量保持一致，且细胞在各孔的表面平均分布。
1. 转染浓度：
siRNA 产品工作浓度因不同的细胞类型及研究目的而异。锐博生物推荐的 siRNA 初始转染浓度为 50nM，转染后检测时间为 24~72h。转染效率一般通过设置时间曲线和浓度梯度进行优化，优化的范围建议为 5~100nM。
2. 转染步骤：
以riboFECT™ CP Reagent 转染siRNA于24孔板，转染浓度为50nM为例，其他规格容器的试剂用量。
1）接种细胞
a. 贴壁细胞：转染前一天，接种1×105细胞至含有适量完全培养基的24孔板培养孔中，使转染时的细胞密度能够达到50~80%。注：1）不同细胞生长速度不同，接种细胞的数量需要依据经验而定；2）每孔接种的细胞数量尽量相同，使细胞均匀分布于培养基表面。
b. 悬浮细胞：接种1×105~5×105个细胞至含有适量完全培养基的24孔板。
2）转染步骤对于每个转染样品，请按以下步骤准备：a. 稀释 siRNA：用 30μl 1X riboFECT™CP Buffer（v1）稀释 1.25μl 20μM siRNA 储存液（v2），轻轻混匀，室温孵育 5min。b. 混合液制备：加入 3μl riboFECT™ CP Reagent（v3），轻轻吹打混匀，室温孵育 0～15min。注：1）请不要振荡，溶液可能会有浑浊，但不会影响转染；2）混合液可室温放置一段时间，但不宜超过 24h。c. 将 riboFECT™CP 混合