细胞提取液:贴壁细胞用冷的 PBS 轻轻清洗,然后用胰蛋白酶消化,1000×g 离心 5 分钟 后收集细胞;悬浮细 胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的 PBS 洗涤 3 次。每 1×106 个 细胞中加入 150-200μLPBS 重悬并通过反复冻融使细胞破碎(若含量很低可减少 PBS 的体 积)。将提取液于 1500×g 离心 10分钟,取上清检测。
细胞培养上清:4000rpm 条件下离心 20min,去除细胞颗粒和聚合物,上清液保存在- 20℃ 以下,避免反复冻融。
计算: 以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标 准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数, 即为样品的实际浓度。
人剪切多聚腺苷酸化特异性因子1(CPSF1) ELISA试剂盒原理:
1) 抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记;
2) 结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性;
3) 酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性又保留酶的活性;
4) 受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应,再加入酶标记的抗原或抗体,业通过反应而结合再固相载体上;
5) 此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例;
6) 加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。测定方法具有很高的敏感度(Pg-ng/ml水平)并且重复性好。以免疫学反应为基础将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。