CAR-T细胞在体外改造过程中需使用逆转录病毒或慢病毒载体将CAR的基因序列插入到患者T细胞基因组中。由于病毒载体介导的基因序列插入具有随机性，从而序列插入可能影响到插入位置周边基因的正常表达，甚至激发原癌基因，引发不受控制的细胞增殖与克隆，导致疾病进一步的恶化。linker-mediated PCR (LM-PCR) 方法基于高通量测序平台，结合慢病毒LTR特异引物巢式PCR技术，可通过分析整合位点的DNA序列，在全基因组层面上寻找病毒插入位置基因信息。（飞凡检测中心）
2020年9月发布的《细胞治疗产品申请临床试验药学研究和申报资料的考虑要点》“生产工艺开发的技术要求”及“质量研究和质量控制中的安全性研究”部分要求提供目的基因在染色体中的整合情况及提供细胞恶性转化（成瘤性和致瘤性）进行安全性研究和评估内容。2020年2月发布的《免疫细胞治疗产品临床试验技术指导原则（试行）》中规定：探索性临床试验的安全性和耐受性要考虑"外源基因随机整合到细胞基因组形成插入突变，导致成瘤性和恶性转化等"。对确证性临床试验的疗效和安全性要求:“继续监测安全性风险，分析重要的已知和潜在的风险信息，包括迟发性不良事件(如致瘤性)的发生率、 严重性和危险因素等，并有必要采取措施使风险*小化。" 2021年2月发布的《基因修饰细胞治疗产品非临床研究与评价技术指导原则（试行）》则明确将"插入突变风险评估"作为非临床安全性研究的内容，并详细规定关键风险因素的评估要点。可见慢病毒载体整合位点检测已经成为细胞治疗产品IND评审及临床试验安全性评估的必检内容。（飞凡检测中心）
单克隆扩增=癌变？相反的，可能是疗效持久的正面信号（飞凡检测中心）
那么在临床过程中发现迟发性单克隆慢病毒整合增殖就一定高度怀疑二次成瘤吗？其实CAR-T治疗到目前为止还没有导致T细胞恶性肿瘤的报告。一项调查年到2017年CAR-CD19临床I/II期ALL、NHL、CLL病人的回顾数据显示，研究队列中NHL患者有11%的继发性恶性肿瘤发生率，与NHL 常规治疗后继发性恶性肿瘤的预期发生率相似 (4–10%) [cordeiro20:_late_event_treat_cd19_target]。（飞凡检测中心）